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MSC無血清培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基有何區(qū)別?
  • 發(fā)布日期:2020-07-03      瀏覽次數(shù):1355
    • 在描述產(chǎn)品區(qū)別之前,先簡單描述下第3代間充質干細胞無血清培養(yǎng)基。
      第3代間充質干細胞無血清培養(yǎng)基是怎么開發(fā)出來的?
      研發(fā)人員根據(jù)近幾十年來,中國及國外的科研人員在間充質干細胞研究方面取得的一些成果,比如什么樣的物質可以很好的促進干細胞生長,什么樣的物質可以抑制間充質干細胞的分化,什么樣的物質有更好的貼壁效果等等。
      在此基礎之上,開發(fā)出一個初步的間充質干細胞無血清培養(yǎng)基配方。
      然后,構建相應數(shù)學模型,結合大量的實驗,確定各種組分組合的比例。
      后,通過應用于不同來源的人體組織(臍帶或脂肪),提取及培養(yǎng)間充質干細胞,微調產(chǎn)品配方,使培養(yǎng)基能夠更為廣泛的適用于人體不同來源的組織中間充質干細胞的提取及培養(yǎng)。
      一句話,是根據(jù)人們對干細胞的認識,專門開發(fā)出來的針對間充質干細胞的培養(yǎng)產(chǎn)品。 
      血清培養(yǎng)基是什么情況? 
      一般應用 DMEM/F12,或 a-MEM,加上胎牛血清。 
      一句話,是天然形成的產(chǎn)品,無法根據(jù)干細胞的特點進行對應調整與優(yōu)化。

      第3代無血清 MSC 培養(yǎng)基與血清 MSC 培養(yǎng)基有什么不同? 
      從大的方面來講,大致有 9 個方面的不同。
      1.從使用安全性來講
      無血清 MSC 培養(yǎng)基更安全。
      該培養(yǎng)基沒有添加血清,也沒有添加任何動物來源的組分,化學成分限定。因此,該培養(yǎng)基沒有任何動物來源組分,在這種間充質干細胞無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞進入人體后,不會引起由于人體免疫排斥所經(jīng)常發(fā)生的過敏及發(fā)燒癥狀。 
      另外,由于沒有任何動物來源的組分,自然也不會有任何與此相關的致病菌或病毒等,比如瘋牛病毒等。 
      2.從使用便利性來講 
      更便利,需要的操作步驟更少。 
      使用友康間充質干細胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)MSC,可用干細胞溫和消化酶(同樣是化學成分限定,無動物源組分)進行消化,且在消化后不需要終止消化(傳統(tǒng)做法一般用血清培養(yǎng)基或血清終止消化),用 PBS 直接稀釋離心去除即可。
      更少的操作,意味著更少的工作量以及更低的污染概率。 
      3.從干細胞產(chǎn)量來講
      MSC 的產(chǎn)量(擴增倍數(shù))高于血清。 
      在 MSC 培養(yǎng)基中培養(yǎng)所得的干細胞數(shù)量,不僅取決于培養(yǎng)基可以提供的營養(yǎng)組分,而且受細胞是否分化的極大影響。 
      第3代MSC 無血清培養(yǎng)基充分利用近幾年的科研成果,特別是干細胞分化與衰老機制的研究,通過組分的調整能夠可以更好的抑制細胞的分化。
      從細胞數(shù)量來講,一般一根 20CM 的臍帶,可以得到原代細胞的數(shù)量為 1E7。前三代的擴增倍數(shù)均在 10 倍以上。(接種密度 8000 cells/cm2)。 
      而血清培養(yǎng)基,由于其來源于動物血液,所以既有抑制干細胞分化的組分,也有促進干細胞分化的組分,沒有辦法人工選擇。 
      比如,血清中含有葡萄糖,再加上培養(yǎng)基里的糖,總含量就比較高了,高濃度糖易促衰老和分化;另外血清中一般均含有外泌體,是細胞分泌的一種囊泡結構,里面含有調節(jié)細胞生長和分化的物質,不同血清中這些物質的比例不一樣,所以也易導致分化;血清中含有代謝廢物,這些物質一般對細胞均有損害,易導致衰老和分化。
      另外,目前很多用戶一般使用帶酚紅的培養(yǎng)基,酚紅作為常見的激素成分,對干細胞的生長有著明顯的誘導分化的作用。
      事實上,使用無血清 MSC 培養(yǎng)基的細胞產(chǎn)量高,是目前中國客戶大量該換為無血清培養(yǎng)基的主要原因。而非安全性。
      4.從細胞質量來講(形態(tài)、活性、干性及表型)
      從鏡下看,無血清 MSC 培養(yǎng)的干細胞形態(tài)短小,呈標準立體梭形,細胞邊緣清晰,透亮。這是細胞更少衰老與分化的直觀表征。
      相比來說血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的 MSC 細胞,細胞形態(tài)扁平,體積更大,邊緣不清晰。
      血清培養(yǎng)基成分復雜,含有很多促進分化的物質,細胞易發(fā)生自發(fā)分化,因而細胞失去干性。另外,在體外定向分化時,易有培養(yǎng)基殘留,會干擾定向分化。
      但無血清培養(yǎng)基配方明確,各物質的量一定,不含干擾組分,細胞不易發(fā)生自發(fā)分化,干性維持較好,即使有殘留,也不會干擾定向分化。
      MSC 無血清培養(yǎng)基的表型,更為符合 MSC 細胞的定義。
      5.從使用成本來講
      使用 MSC 無血清培養(yǎng)基,成本傾向于越來越低。
      無血清培養(yǎng)基,其每一種組分都是人工合成的。包括氨基酸、無機鹽、重組蛋白等。隨著技術進步與產(chǎn)能擴大,所有人工制造的組分的生產(chǎn)成本均會大幅下降。
      特別是隨著培養(yǎng)基研發(fā)企業(yè)不斷的改進產(chǎn)品,比如通過配方優(yōu)化,不斷降低昂貴的重組蛋白的使用量,干細胞培養(yǎng)基也在逐步向著*化學成分限定培養(yǎng)基發(fā)展(CD 培養(yǎng)基),CD 培養(yǎng)基不含昂貴的重組蛋白,成本自然會大幅下降。
      從用戶角度講,特別是干細胞藥物企業(yè)而言,選擇血清培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基就是核心生產(chǎn)工藝的選擇。一旦選擇,以后極難更改。所以他們更傾向于選擇以后成本會越來越低的無血清培養(yǎng)基。 
      6.從干細胞藥物申報角度來講
      由于無血清培養(yǎng)基有著明確的產(chǎn)品配方,因此,監(jiān)管機構要求的關于細胞殘留培養(yǎng)基組分的安全性驗證的工作非常容易完成。
      由于血清培養(yǎng)基,血清中已知組分有 150 多種,還有多種未知組分,細胞制品中的培養(yǎng)基殘留安全性驗證工作,極難完成,如果不說不可能的話。
      7.從控制干細胞分泌因子角度來說
      無血清培養(yǎng)基由于全組分都是人工添加的,因此,可以很方便的通過調節(jié)一些組分,來調節(jié)干細胞分泌的蛋白的含量。比如干細胞分泌的 PEG2,MSC 無血清培養(yǎng)基可以極為方便的通過調整不同組分的對比,大幅提高 PEG2 的表達。當然,其他涉及干細胞制成品的分泌的細胞因子的表達量均可通過 MSC 無血清培養(yǎng)基配方的調整得已實現(xiàn)。
      8.從細胞衰老角度來說
      無血清培養(yǎng)基當然不會添加會加速細胞衰老的物質。
      而血清培養(yǎng)基中的血清組分很復雜,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分。這些組分中,有些對細胞生長是有利的,有些對細胞生長是無作用的,有些對細胞生長反而是有害的。研究表明*誘導后的MSCs 出現(xiàn)衰老特征,在體外培養(yǎng)時,這些活性氧(ROS)通過氧化 DNA、蛋白質等生物大分子對細胞造成傷害,加速細胞的衰老。干細胞對微環(huán)境中 ROS 的累積水平特別敏感,而血清中含有 ROS,可能會導致細胞內 ROS 大量聚集而引起細胞出現(xiàn)應激誘導的早熟性衰老。 
      9.從性能穩(wěn)定性來說
      無血清培養(yǎng)基有明確的配方,因此,批間差極小,近乎沒有。
      而血清來自不同個體的牛,由于牛的體質不同,其血清中各種組分的差異很大。比如血清中的 EGF,有的含量為 10ug/ml,有的僅為 2ug/ml,相差了 5 倍。不同品牌間,甚至同品牌產(chǎn)品批次差別可能很大。培養(yǎng)效果沒有保證。

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