国产精品视频500部丨天堂视频中文在线丨狠狠色伊人亚洲综合网站l丨136fldh导航福利视频丨亚洲综合激情丨yes4444视频在线观看丨人人草网站丨精品国产露脸对白在线观看丨成人国产欧美大片一区丨亚洲国产剧情中文视频在线丨亚洲色图欧美视频丨精品久久网丨成人福利网丨久久精品这里丨大奶毛片丨暖暖日本在线观看丨国产美女a做受大片观看丨国产精品色拉拉丨日韩中文字幕在线专区丨九九av在线丨久久午夜精品视频丨肉丝美脚视频一区二区丨草草视频网站丨久久精品视频在线看丨欧美性欧美zzzzzzzzz

硝酸纖維素膜又稱為NC膜， 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。所以NC膜成為該試驗中最重要的耗材
 

NC膜、PVDF膜的選擇

western blot 中膜的選擇是實驗成功的關(guān)鍵點，Western blot實驗中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么區(qū)別呢？怎樣才能選擇最恰當(dāng)?shù)碾s交膜進行Western blot實驗?zāi)兀?/p>

Western Blot時該選擇NC膜還是PVDF膜?

硝酸纖維素膜：硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白印跡實驗的標(biāo)準(zhǔn)固相支持物。在低離子轉(zhuǎn)移緩沖 液的環(huán)境下，大多數(shù)帶負電荷的蛋白質(zhì)會與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結(jié)合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜（NC膜）的這個特性，而且易于封閉非特異性結(jié)合，從而得到了廣泛的應(yīng)用。

在非離子型的去污劑作用下，結(jié)合的蛋白還可以被洗脫下來。根據(jù)被轉(zhuǎn)移的蛋白分子量大小，要選擇不同 孔徑的硝酸纖維素膜（NC膜）。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結(jié)合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm，蛋白的轉(zhuǎn)移就很難進行了。因此，我們通 常用0.45μm和0.2μm兩種規(guī)格的硝酸纖維素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如果用 0.45μm的膜就會發(fā)生“Blowthrough"的現(xiàn)象。從膜的質(zhì)地上來看，最重要的指標(biāo)就是單位面積上能夠結(jié)合的蛋白的量。

硝酸纖維素膜（NC膜）的結(jié)合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關(guān)，市場上有些硝酸纖維素膜（NC膜）通常會還有大量的醋酸纖維素，因而降低了蛋白的結(jié)合量。如果采用的是100%純度的硝酸纖維素， 保證了最大的蛋白結(jié)合量，可達80-150μg/cm2。由于100%的純度，因而也大大減少了非特異性的結(jié)合，降低雜交背景，無 需高嚴謹度的洗脫步驟。其次，膜的強度和韌性也是需要考慮的因素。常規(guī)的硝酸纖維素膜比較脆，漂洗一兩次就會破損，不能反復(fù)使用。

PVDF轉(zhuǎn)移膜：PVDF是一種高強度、耐腐蝕的物質(zhì)，通常是用來制造水管的。 PVDF膜可以結(jié)合蛋白質(zhì)，而且可以分離小片段的蛋白質(zhì)，最初是將它用于蛋白質(zhì)的序列測定，因為硝酸纖維素膜在Edman試劑中會降解，所以就尋找了 PDVF作為替代品，雖然PDVF膜結(jié)合蛋白的效率沒有硝酸纖維素膜高，但由于它的穩(wěn)定、耐腐蝕使它成為蛋白測序理想的用品，一直沿用至今。PVDF膜與 硝酸纖維素膜一樣，可以進行各種染色和化學(xué)發(fā)光檢測，也有很廣的適用范圍。這種PVDF膜，靈敏度、分辨率和蛋白親和力在精細工藝下比常規(guī)的膜都要高，非 常適合于低分子量蛋白的檢測。但PVDF膜在使用之前必需用純甲醇進行浸泡飽和1-5秒鐘。

使用PVDF膜時，一定要先用無水甲醇預(yù)處理，再在transfer buffer中平衡好才可以使 用(PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質(zhì)結(jié)合)。經(jīng)過預(yù)處理的PVDF膜在轉(zhuǎn)膜時， 可以使用不含甲醇的transfer buffer。而使用NC膜時，有的需要用無水甲醇處理，有的則不必，直接用transfer buffer平衡好就可以了。