国产精品视频500部丨天堂视频中文在线丨狠狠色伊人亚洲综合网站l丨136fldh导航福利视频丨亚洲综合激情丨yes4444视频在线观看丨人人草网站丨精品国产露脸对白在线观看丨成人国产欧美大片一区丨亚洲国产剧情中文视频在线丨亚洲色图欧美视频丨精品久久网丨成人福利网丨久久精品这里丨大奶毛片丨暖暖日本在线观看丨国产美女a做受大片观看丨国产精品色拉拉丨日韩中文字幕在线专区丨九九av在线丨久久午夜精品视频丨肉丝美脚视频一区二区丨草草视频网站丨久久精品视频在线看丨欧美性欧美zzzzzzzzz

一、 貼壁細胞傳代（以一個T25瓶為例）

1、 吸出原培養(yǎng)液；

2、 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；

3、 加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；

4、 消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；

5、 加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復(fù)吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；

6、 收集細胞懸液離心，1200rpm（約250g） 3分鐘，離心完吸出上清丟棄。

7、 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。

8、 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。

二、 懸浮細胞傳代（以一個T25瓶為例）

1、 輕輕吹散懸浮細胞，部分貼壁松散的懸浮細胞可直接吹打培養(yǎng)瓶底部使細胞懸浮，收集細胞懸液到無菌離心管中，離心1200rpm（約250g） 3分鐘，離心完畢吸出上清丟棄;

2、 加入適量新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按比例接種至培養(yǎng)瓶（接種比例按實際情況，不確定可計數(shù)后再接種）;

3、 常規(guī)細胞推薦以3~5×105cells/ml傳代，長到2×106cells/ml傳出;

4、 建議剛開始幾代計數(shù)后傳代，后面可以根據(jù)經(jīng)驗按比例傳代。

三、 半貼壁半懸浮細胞傳代（以一個T25瓶為例）

1、 培養(yǎng)液（含懸浮的細胞）：用移液器吸出培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到無菌離心管中；

2、 貼壁部分：用1ml PBS洗細胞，吸出PBS放入到第1步裝有培養(yǎng)液的離心管中收集（不要直接丟棄，里面有細胞）；

3、 培養(yǎng)瓶加入胰酶1ml，放入培養(yǎng)箱靜置消化；

4、 消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞明顯收縮變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；

5、 用3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，將消化下來的細胞懸液吹散細胞后收集到第1步的離心管；

6、 將離心管在1200rpm（約250g） 3min離心，離心完畢棄掉上清，加入新的培養(yǎng)基重懸，按實際情況分瓶，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。