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標(biāo)記物的鑒定

    1．放射化學(xué)純度  是指單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率，一般要求大于95％。常用的測(cè)定方法是利用三氯醋酸將待測(cè)樣品中（預(yù)加白蛋白助沉淀）所有蛋白質(zhì)沉淀，離心后測(cè)定沉淀物（標(biāo)記物）的放射性并計(jì)算其占待測(cè)樣品總放射性的百分率。該項(xiàng)參數(shù)還是觀察在貯存期內(nèi)標(biāo)記物脫碘程度的重要指標(biāo)。

    2．免疫活性（immunoreactivity）  指制備的標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力。它反映標(biāo)記過程中被標(biāo)記物免疫活性受損情況。測(cè)定方法是用少量的標(biāo)記物與過量抗體反應(yīng)，然后測(cè)定標(biāo)記物與抗體結(jié)合部分的放射性，并計(jì)算與加人標(biāo)記物總放射性的百分比，該值越大，表示抗原免疫活性受損越少。

    3．比放射性（specificradioactivity）  是指單位化學(xué)量標(biāo)記物中所含的放射性強(qiáng)度，也可理解為每分子被標(biāo)記物平均所結(jié)合放射性原子數(shù)目，常用Ci／g、mCi／mg或Ci／mmol等單位表示。標(biāo)記物比放射性較高時(shí)，可提高方法的靈敏度（因相同放射性強(qiáng)度時(shí)，高比放射性者標(biāo)記物用量少）；但比放射性過高時(shí)，輻射自損傷大，標(biāo)記物的免疫活性易受影響，且貯存穩(wěn)定性差。比放射性計(jì)算方法有計(jì)算法和自身置換法，簡(jiǎn)述如下：

    （1）計(jì)算法：依據(jù)標(biāo)記反應(yīng)中放射性核素的利用率（標(biāo)記率）來計(jì)算。

    比放射性（uCi／Pg）＝（投入的總放射性X標(biāo)記率）／被標(biāo)記物化學(xué)量

    標(biāo)記率（核素利用率）＝（標(biāo)記物總放射性／總投入放射性）X100％

    該法計(jì)算操作簡(jiǎn)便易行，但影響因素多，結(jié)果欠。

    （2）自身置換法（self-displacement）  該法通過比較標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原的免疫活性來測(cè)定純化后標(biāo)記物的比放射性。方法為：作一條常規(guī)RIA標(biāo)準(zhǔn)曲線，其反應(yīng)系統(tǒng)由抗體（*）、標(biāo)記抗原（定量）和不同劑量的標(biāo)準(zhǔn)抗原組成；由于標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原的分子濃度之和大于抗體的結(jié)合容量，標(biāo)記抗原與抗體的結(jié)合率（B／T％）隨標(biāo)準(zhǔn)抗原的增加因競(jìng)爭(zhēng)抑制而減少；同時(shí)另作一條標(biāo)記抗原自身置換曲線，反應(yīng)系統(tǒng)僅含有抗體和不同劑量的標(biāo)記抗原，由于抗體*，故標(biāo)記抗原的結(jié)合率也隨標(biāo)記抗原總量的增加而減少，即所謂自身置換。因此，若標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)晶抗原具有相同的免疫活性，則上述兩條曲線應(yīng)平行。表明在相同的放射性結(jié)合參數(shù)（B／T％）水平上，與抗體結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)抗原和標(biāo)記抗原的物質(zhì)濃度*相同；由此可通過選擇不同放射結(jié)合水平的標(biāo)準(zhǔn)抗原化學(xué)量（以ng／m1或nmol／ml表示）和相應(yīng)的標(biāo)記抗原放射性計(jì)量（以cpm／ml表示，其中cpm可換算為Ci或nCi），經(jīng)直線回歸即可計(jì)算出該標(biāo)記物的比放射性）。

125I標(biāo)記物自身置換曲線

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