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全自動(dòng)酶免儀的應(yīng)用體會(huì)與技巧

上海聯(lián)碩生物科技有限公司

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）以操作簡(jiǎn)便、技術(shù)可靠、試劑方便易得等優(yōu)勢(shì)，在醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中已被廣泛應(yīng)用。特別是從二十世紀(jì)九十年代開(kāi)始，ELISA的靈敏度和特異性以及檢測(cè)過(guò)程的自動(dòng)化程度得到顯著提高和改善，ELISA從而成為檢測(cè)傳染病血清學(xué)（病毒性肝炎、艾滋病等）、腫瘤標(biāo)志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)的主要技術(shù)。
        隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，ELISA將更多地參與診斷、治療及療效的判斷，其技術(shù)已從手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)朝多功能、多用途聯(lián)用流水線發(fā)展，全自動(dòng)酶免分析儀正在世界各種實(shí)驗(yàn)室普及。鑒于以上，我院于2002年12月從意大利SEAC公司購(gòu)進(jìn)一臺(tái)ALISEI全自動(dòng)酶免分析儀，配以上?？迫A公司ELISA試劑，經(jīng)一年的使用、觀察與對(duì)比，體會(huì)如下：

        一、測(cè)試程序編輯

        ALISEI提供的英文控制軟件，可方便用戶(hù)針對(duì)每項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目，按其操作說(shuō)明簡(jiǎn)便而具體地進(jìn)行編程，并可作測(cè)試前預(yù)稀釋工作編輯；并靈活地對(duì)操作步驟加以適當(dāng)?shù)卣{(diào)整（例：上海科華公司提供的檢測(cè)HEV-IgM和HEV-IgG試劑盒，HEV-IgM加樣時(shí)只需加50μl血清，而HEV-IgG加樣時(shí)需100μl樣品稀釋液和10μl血清，用戶(hù)可利用軟件提供的Disp Regent+┄功能使100μl樣品稀釋液和10μl血清一步完成，從而使以上兩項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目的操作步驟達(dá)到一致，可以在同一塊微孔板進(jìn)行測(cè)試）。另對(duì)于兩種操作步驟相似的測(cè)試項(xiàng)目，用戶(hù)利用COPY（復(fù)制）功能，復(fù)制一個(gè)源程序并稍加修改，即可得到一個(gè)與源程序步驟相似的程序，從而簡(jiǎn)便了操作程序的編輯。

        另以上海科華公司生產(chǎn)的乙肝二對(duì)半檢測(cè)試劑（立可讀）為例：如果實(shí)驗(yàn)室當(dāng)天的乙肝二對(duì)半檢測(cè)量小于44人份，則占用ALISEI的三塊板；如果多于44人份，則占用ALISEI的五塊板。筆者將HBsAg的檢測(cè)程序復(fù)制為HBsAg1、 HBsAg2、 HBsAg3，進(jìn)行人為拼板，即HBsAg-HBsAb為一塊板、HBeAg-HBsAg1為一塊板，等拼為四塊板，這樣就可以在占用ALISEI四塊板的基礎(chǔ)上同一批檢測(cè)多至68人份的乙肝二對(duì)半。

        二、檢測(cè)流程圖

        每天開(kāi)機(jī)后，用戶(hù)按當(dāng)天的標(biāo)本量添加病人資料，軟件即自動(dòng)編輯，進(jìn)行時(shí)間優(yōu)化管理，zui終生成TMS（時(shí)間管理系統(tǒng)）圖。但有時(shí)TMS所提供的流程圖并不能使用戶(hù)滿(mǎn)意，用戶(hù)可以利用軟件提供的SWAP（位置互換）功能，對(duì)相應(yīng)的測(cè)試項(xiàng)目的檢測(cè)序號(hào)進(jìn)行互換，以期望得到滿(mǎn)意的TMS圖。所以建議用戶(hù)在編輯測(cè)試程序時(shí)，將步驟繁瑣的測(cè)試項(xiàng)目序號(hào)靠前。

        三、防止交叉污染

        經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心測(cè)試證明：ALISEI的設(shè)計(jì)攜帶污染率<1ppm，實(shí)際攜帶污染率<0.1ppm[1]。
        近一段時(shí)間發(fā)現(xiàn)，每天檢測(cè)結(jié)果中乙肝二對(duì)半HBsAg檢測(cè)板*、第二板條本底偏高。經(jīng)仔細(xì)觀察每天的時(shí)間優(yōu)化管理?xiàng)l帶，發(fā)現(xiàn)儀器加樣針?lè)峙浜每?/font>HCV酶標(biāo)二抗后，即進(jìn)行HBsAg顯色劑的分配工作。筆者懷疑是否由于抗HCV酶標(biāo)二抗的*附著力引起痕量污染。筆者隨即對(duì)抗HCV的操作步驟稍加修改：即在加入酶標(biāo)二抗后，插入兩步洗滌液灌注、沖洗加樣針程序。經(jīng)過(guò)測(cè)試，發(fā)現(xiàn)乙肝二對(duì)半HBsAg檢測(cè)板*、第二板條本底偏高問(wèn)題已得到解決。

        當(dāng)然，筆者認(rèn)為插入的兩步灌注、沖洗加樣針程序，如果改作*步為終止液灌注、沖洗，第二步為洗滌液灌注、沖洗，效果將更加明確。從以上實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，作為檢驗(yàn)人員，不能拘泥于全自動(dòng)分析儀所固有的操作模式，應(yīng)發(fā)揮人的主觀能動(dòng)性，使機(jī)器更好地為人服務(wù)。

        四、讀數(shù)系統(tǒng)

        ALISEI采用的8光纖三波長(zhǎng)讀數(shù)，去除測(cè)試過(guò)程中包括微孔板劃痕在內(nèi)的一切干擾，使結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，zui大線性范圍OD值可達(dá)9.0。

        五、測(cè)試項(xiàng)目

        ALISEI除了定性試驗(yàn)，還可做定量試驗(yàn)、親和力試驗(yàn)、過(guò)敏原檢測(cè)等。

        六、不足之處

        1. ALISEI提供6塊板、12個(gè)項(xiàng)目同時(shí)在線檢測(cè)，但對(duì)于開(kāi)展多于12個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室就凸顯不足。廠方已聽(tīng)取了廣大用戶(hù)的要求，在新提供的控制軟件版本中，作出相應(yīng)修改：可提供6塊板、16個(gè)項(xiàng)目同時(shí)在線檢測(cè)。

        2. 由于目前的一些檢測(cè)項(xiàng)目（例：類(lèi)風(fēng)濕因子分型檢測(cè)）需用OPD（鄰苯二胺）顯色，而OPD顯色液穩(wěn)定性差，需臨時(shí)配制，并需要在半小時(shí)內(nèi)應(yīng)用；而ALISEI在工作時(shí)是全封閉進(jìn)行。若將此類(lèi)項(xiàng)目用ALISEI檢測(cè)，勢(shì)必要在中途將儀器暫停，放入顯色液，這將帶來(lái)諸多麻煩。

        綜上所述，引進(jìn)ALISEI全自動(dòng)酶免儀不僅能提高工作效率，還能節(jié)約勞動(dòng)力，使酶免試驗(yàn)的質(zhì)量管理更加規(guī)范，并使ELISA的精密度、靈敏度、特異性同時(shí)有所提高，能真正實(shí)現(xiàn)酶免實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化和網(wǎng)絡(luò)化。

        參考文獻(xiàn)：
        [1] ALISEI全自動(dòng)酶免分析儀質(zhì)量測(cè)試:W（X-040-2001）. 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心.